Métodos de caracterización iPSC

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Los métodos de caracterización in vitro son esenciales para garantizar la calidad y seguridad de las células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Estos métodos permiten evaluar las características moleculares y funcionales de las iPSC, garantizando su identidad, estabilidad y diferenciación adecuada.

Caracterización Molecular

- Analítica de expresión génica: a través de técnicas como la transcripción o la secuenciación, se analizan los perfiles de expresión génica para evaluar la expresión de marcadores pluripotentes (p. ej., OCT4, SOX2, NANOG) y la similitud con las células embrionarias.
- Analítica de metilación del ADN: métodos como la secuenciación del bisulfito de sodio permiten evaluar los patrones de metilación del ADN, que están estrechamente relacionados con la pluripotencia y la diferenciación celular.
- Analítica de transcriptoma de una sola célula: la secuenciación de ARN de una sola célula proporciona información sobre la heterogeneidad de las iPSC y permite identificar subpoblaciones con diferente potencial de diferenciación.

Caracterización Funcional

- Ensayos de diferenciación in vitro: las iPSC se diferencian en linajes específicos, como neuronas, células cardiacas o hepatocitos. La evaluación de su capacidad para diferenciarse en diferentes tipos celulares es esencial para confirmar su potencial pluripotente.
- Formación de teratoma: la inyección de iPSC en ratones inmunodeficientes da lugar a la formación de teratomas, que contienen una mezcla de tejidos derivados de las tres capas germinales. La presencia de teratomas demuestra la capacidad pluripotente de las iPSC.
- Inyección en blastocistos: las iPSC se inyectan en blastocistos de ratones para evaluar su capacidad para integrarse en el desarrollo embrionario. La contribución de las iPSC a la químera resultante indica su potencial para la terapia celular.

Otros Métodos

- Cariotipado: el análisis de los cromosomas garantía la estabilidad genética de las iPSC y descarta aneuploías o aberraciones cromosómicas.
- Análisis de ploidía: la medición del contenido de ADN determina la ploidía de las iPSC, asegurando que sean diploides y no presenten aneuploías.
- Evaluación de marcadores superficiales: mediante citometría de flujo o inmunofluorescencia, se analizan marcadores superficiales característicos de las células madre pluripotentes para confirmar su identidad.

La combinación de estos métodos proporciona una caracterización completa de las iPSC, garantizando su uso seguro y eficaz en la investigación y las aplicaciones clínicas. Estos métodos contribuyen a avanzar en el campo de las células madre y a desarrollar terapias regenerativas innovadoras.